宿主細(xì)胞DNA(Host Cell DNA)是指用于生產(chǎn)生物制品（如重組蛋白、疫苗、生物藥物等）細(xì)胞中的遺傳物質(zhì)。在生物技術(shù)和生物制藥行業(yè)中，這類(lèi)生物制品通常是通過(guò)在特定宿主細(xì)胞中表達(dá)目標(biāo)基因來(lái)生產(chǎn)的。這些宿主細(xì)胞的類(lèi)型多樣，包括細(xì)菌（例如大腸桿菌）、酵母、昆蟲(chóng)細(xì)胞和哺乳動(dòng)物細(xì)胞等。

然而在實(shí)際生產(chǎn)和純化過(guò)程中，宿主細(xì)胞DNA往往會(huì)不可避免地遷移到最終產(chǎn)品中，由于其可能導(dǎo)致安全性問(wèn)題（如潛在的基因毒性或免疫反應(yīng)），因此，監(jiān)管機(jī)構(gòu)通常會(huì)制定嚴(yán)格的宿主細(xì)胞DNA殘留限制標(biāo)準(zhǔn)，以確保生物制品的安全性和有效性。

宿主DNA殘留標(biāo)準(zhǔn)

我國(guó)藥典及美國(guó)FDA均對(duì)宿主殘留DNA量進(jìn)行明文規(guī)范：例如2020版《中國(guó)藥典》明確規(guī)定用Vero細(xì)胞生產(chǎn)人用狂犬病疫苗，Vero細(xì)胞DNA殘留應(yīng)不高于3ng/劑；基于Vero細(xì)胞的脊髓灰質(zhì)炎疫苗，DNA殘留量不高于50pg/劑；基于CHO細(xì)胞的乙肝疫苗，DNA殘留量不高于10pg/劑。

表 宿主細(xì)胞殘留DNA的限定標(biāo)準(zhǔn)

隨著技術(shù)的發(fā)展，人們認(rèn)識(shí)到，除了要減少殘留DNA的量，也應(yīng)該降低宿主DNA片段的大小至功能基因大?。ù蠹s200bp）以下，從而減少致瘤性和感染性風(fēng)險(xiǎn)。

基于此，CDE 2022年5月發(fā)布的《體內(nèi)基因治療產(chǎn)品藥學(xué)研究與評(píng)價(jià)技術(shù) 指導(dǎo)原則（試行）》中明確指出，生產(chǎn)若使用了腫瘤細(xì)胞系（如Hela細(xì)胞）、致瘤細(xì)胞系，或攜帶有致瘤基因、病毒來(lái)源序列的細(xì)胞（如HEK 293T細(xì)胞），在確保無(wú)完整活細(xì)胞殘留的同時(shí)，需對(duì)DNA的殘留量和殘留片段大小進(jìn)行控制，合理擬定標(biāo)準(zhǔn)限度。如有可能，建議盡量將殘留DNA控制在10ng/劑以內(nèi)， DNA殘留片段的大小控制在200bp以下。

表 宿主細(xì)胞殘留DNA片段風(fēng)險(xiǎn)等級(jí)

去除宿主DNA常見(jiàn)方法

宿主DNA的去除可以通過(guò)多種方法實(shí)現(xiàn)，每種方法都有其特定的優(yōu)缺點(diǎn)，目前常見(jiàn)的方法主要為層析法、酶法、沉淀法等。傳統(tǒng)單一的方法均存在核酸殘留去除不凈、工作量大、耗時(shí)長(zhǎng)等缺陷，廣譜核酸酶則可完美解決此類(lèi)難點(diǎn)。

廣譜核酸酶，又稱為全能核酸酶，一種來(lái)源于粘質(zhì)沙氏菌（Serratia marcescens，又稱靈桿菌）的非特異性核酸內(nèi)切酶，它不含有原核生物表達(dá)的細(xì)菌內(nèi)毒素。無(wú)論是實(shí)驗(yàn)研究還是工業(yè)生產(chǎn)，廣譜核酸酶都是目前少有能夠同時(shí)高效降解任何形式DNA和RNA的酶。

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廣譜核酸酶的使用與優(yōu)勢(shì)

廣譜核酸酶能夠降解所有形式的DNA和RNA，包括單鏈、雙鏈、線性、超螺旋和環(huán)狀DNA、RNA及基因組DNA，對(duì)核酸序列沒(méi)有特異性。在純化工藝中使用廣譜核酸酶，可有效降低細(xì)胞裂解液粘度，改善蛋白純化工藝，高效去除重組蛋白制品核酸污染，大幅降低終產(chǎn)品污染風(fēng)險(xiǎn)，滿足法規(guī)要求，在細(xì)胞治療、病毒載體疫苗等領(lǐng)域應(yīng)用廣泛。

核酸酶的作用位點(diǎn)

廣譜核酸酶在廣泛的條件下仍有很強(qiáng)的生物酶活性，跟大多數(shù)生物酶一樣，核酸酶的活性也會(huì)隨溫度、pH值、Mg2+、緩沖體系和底物濃度等因素的改變而變化。對(duì)于廣譜核酸酶使用方法，可以點(diǎn)擊小編之前發(fā)布的文章進(jìn)行了解↓

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相關(guān)產(chǎn)品

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高度穩(wěn)定性

比活性大于1000 KU/mg蛋白

無(wú)動(dòng)物源性成分

避免原核細(xì)胞的內(nèi)毒素污染

不含蛋白酶殘留

供應(yīng)穩(wěn)定，到貨快

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